細胞培養(yǎng)基的基本要求:
體外培養(yǎng)的細胞直接生活在培養(yǎng)基中,因此培養(yǎng)基應能滿足細胞對營養(yǎng)成分、促生長因子、激素、滲透壓、pH等諸多方面的要求。
一、營養(yǎng)成分維持細胞生長的營養(yǎng)條件一般包括以下幾個方面:
1、氨基酸:是細胞合成蛋白質的原料。所有細胞都需要12種必須氨基酸:亮、異亮、蘇、賴、色、苯丙、蛋、組、酪。它在細胞代謝過程中有重要作用,所含的氮是核酸中嘌令和嘧啶合成的來源,同樣也是合成三、二、一磷酸酰苷所需要的基本物質。 體外培養(yǎng)的各種培養(yǎng)基內都含有必需氨基酸。
2、單糖:培養(yǎng)中的細胞可以進行有氧與無氧酵解,六碳糖是主要能源。此外六碳糖也是合成某些氨基酸、脂肪、核酸的原料。細胞對葡萄糖的吸收能力最高。
體外培養(yǎng)動物細胞時,幾乎所有的培養(yǎng)基或培養(yǎng)液中都以葡萄糖作為必含的能源物質。
3、無機離子與微量元素:細胞生長除需要鈉、鉀、鈣、鎂、氮和磷等基本元素,還需要微量元素,如鐵、鋅、硒、銅、錳、鉬、釩等。
4、維生素:主要扮演輔酶、輔基的角色,泛酸、吡哆醇、核黃素、硫胺素、維生素B12都是培養(yǎng)基常有的成分。
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1. 研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據(jù)實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
2. 研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
3. 研究的對象是活細胞
在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態(tài)、結構、生命活動等。
4. 研究內容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術:如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備
記錄方式可采用攝影照片、縮時電影、電視等多種手段。
5. 研究的范圍比較廣泛
應用的學科領域較為寬廣,如細胞學、免疫學、腫瘤學、生物化學、遺傳學、分子生物學等;適用的對象范圍廣,從低等動物到高等動物,一種動物的不同年齡階段以及不同組織,都可進行有針對性的研究。