試劑盒中的稀釋線性及回收率:
a.稀釋線性一般指樣本稀釋線性,是將樣本梯度稀釋下來,看各稀釋梯度濃度是否成線性;參考樣本稀釋線性可以選擇樣本的稀釋倍數(shù)。
b.稀釋線性也有做加標(biāo)稀釋線性的情況,加標(biāo)稀釋線性是將標(biāo)準(zhǔn)品加入樣本中測(cè)定加入的標(biāo)準(zhǔn)品濃度測(cè)定是否準(zhǔn)確;同樣也是確定待測(cè)樣本稀釋倍數(shù)的參考指標(biāo)。一般線性和回收率的范圍在80%-120%比較合適。
c.試劑盒的其它指標(biāo):靈敏度:試劑盒能夠檢測(cè)到的樣本zui低濃度的能力,如果待檢指標(biāo)含量很低,需要選擇高靈敏度的ELISA試劑盒。
1、查找待測(cè)樣本的蛋白濃度:可以通過美國(guó)國(guó)立生物技術(shù)信息中心(NCBI)的文獻(xiàn),Universal Protein(uniprot)上給出的蛋白表達(dá)量參考值來比較elisa試劑盒中給出的樣本值與報(bào)道值是否一致。
2、試劑盒的應(yīng)用種屬、檢測(cè)樣本的種類:除試劑盒特別說明外,一般不同種屬不能通用。常見待測(cè)樣本種類有:血清和血漿(不同抗凝劑),細(xì)胞上清,和細(xì)胞裂解液,試劑盒中不同樣本的稀釋液不混用。
3、試劑盒的檢測(cè)范圍:也就是標(biāo)曲范圍,特別要注意待測(cè)樣本濃度是否落在標(biāo)曲范圍內(nèi),對(duì)于濃度很高的樣本,可以先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索到比較好的稀釋倍數(shù)后再大量測(cè)定樣本。